QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kit [RUO]

新しいブレンド酵素で複数の変異導入

QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kitは、プラスミドDNAへ同時に最大5箇所の変異を導入するための、最も早く信頼できる方法です。正確性の高い酵素をベースに新たに開発された酵素を使うことで、実験に要する時間が大幅に短縮されるとともに、目的部位への変異導入が正確に行われます。QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kitは、従来のMulti-site mutagenesis kitと比較して最大で3倍早く変異導入ができます。

従来のQuikChange Multi kitと同様に、2本鎖のプラスミドDNAを鋳型とし、変異を導入する部位のそれぞれ1箇所につき1種類のオリゴヌクレオチドを使用します。フュージョンタイプので正確性の高いPfu DNAポリメラーゼをベースに開発された独自のブレンド酵素を使用し、DNA合成を高い正確性で、かつ短い時間で行うことが出来ます。新たに最適化されたDpnIにより鋳型消化の時間も大幅に短縮され、全体として約3時間で複数の部位への変異導入が完了します。

超高速プロトコール

QuikChange Lightning Multi Site-Directedでは新しいテクノロジーにより、変異鎖の合成と鋳型プラスミドのDpnI消化の時間が大幅に短縮されています。時間が短縮されたことで一日で実験を完了可能で、次の日には変異の入ったDNAコンストラクトが得られます。鋳型プラスミドが5 kbの場合、QuikChange Lightning Multiは、従来のQuikChange Mutiキットよりも4倍早く変異導入ができます。

一日での複数への変異導入によって時間短縮

QuikChange Lightning Multi Kitは、一度に5箇所までの変異導入を実行するための最も早くて効率のよい方法です。1回の反応で5箇所までの変異導入を行うことで、1箇所ずつ変異を導入してゆく場合と比較して、約2週間もの時間と労力が削減されています。

飽和変異導入によりタンパク質機能解析を加速

タンパク質の構造活性相関の解析を行う際に、部位特異的飽和変異導入は、１塩基置換やエラープローンPCRによるランダムな変異導入と比較して、はるかに網羅性の高い方法です。従来のエラープローンPCRを用いた手法では、特殊な条件下でPCRをおこなって遺伝子配列のいたるところにランダムな１塩基置換が導入されます。しかし、ひとつのコドンあたり2, 3塩基の置換を入れることは不可能で、大部分の変異型はこの方法では現れないことになります。

タンパク質の機能解析を効率よく行うために、活性の中心部位あるいはその近傍の部位に可能性がある全ての変異を導入する飽和変異導入用は非常に強力な方法です。QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kitを用いることで迅速かつ確実に飽和変異の導入することが可能ですので、基質特異性、温度感受性、あるいは溶媒に対する溶解性などの性質を迅速に効率よく改変することが可能です。

Engineered Mutant Clone Collections

QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kitでは、特定部位における飽和変異導入や、部位特異的変異におけるすべての可能な組み合わせ（多変異オリゴヌクレオチド）、もしくはその両方を網羅したEngineered Mutant Clone Collectionを１日で作製することができます。作製されたEngineered Mutant Clone Collectionをスクリーニングすることで、目的の機能に最も適したアミノ酸を識別することも可能にします。さらには、ライブラリーの一部のシークエンシングを行うことで、独自の変異体パネルを作製し、将来の研究に供することも可能です。

アジレント(旧ストラタジーン)でもQuikChange Multi Site-Directed Mutagenesis Kitを使用して、特定のDNAポリメラーゼに対して飽和変異導入を行い、ヌクレオチドの取り込みが大幅に促進された変異体を４種類同定しました。このことからも、飽和変異導入はタンパク質機能を改善するための非常に強力なツールといえます。

エレガントなnon-PCR法により高い正確性・高い効率を実現

QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kitの技術は、意図しない2次的な変異を徹底的に減らすためにnon-PCR手法を採用しています。アジレント(旧ストラタジーン)の正確性の高いDNAポリメラーゼとnon-PCR法を組み合わせることで、高い変異導入効率を果たしながら、変異鎖合成中に意図しないエラーが入る可能性を最小限にしています。

3ステップで使用が容易

目的の変異を含む変異導入プライマーは、すべて同じストランドに結合するように設計します。変異導入プライマーから伸張を開始し、独自のブレンド酵素がストランド-ディスプレイスメント活性が出ない条件化で、非常に高い正確性で伸張を進めます。1回の反応で、複数の変異とニックをもつ鎖が合成されますが、その後ニックはブレンド酵素により閉じられます。

次に、元の鋳型DNAを消化するために DpnⅠ処理を行います。さらに、複数の変異が導入された一本鎖DNAはXL10-Gold ウルトラコンピテントセルにトランスフォーメーションすることで、 in vivo で変異一本鎖DNAが二本鎖に転換されます。変異導入効率に関しては、キット付属の3つの変異導入プライマーを同時に用いたコントロールで、3つとも変異が導入される効率が50％、また単一の変異誘導プライマーのみを用いた場合は最大で95％に達します。

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ORDERING INFORMATION

Product	Catalog #	Amount	Price
QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kit, 10 rxn (Academic) 210515 10 rxns お問い合わせください Call Quick and efficient method for carrying out site-directed mutagenesis in up to 5 sites simultaneously using new QuikChange Lightning enzyme formulation combined with a rapid protocol 3x faster than the original QuikChange Multi kit. All necessary components required to perform 10 multi-site mutagenesis reactions. No additional purchase is required. For academic use only. 分析保証書 (C of A)　　 マニュアル
QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kit, 30 rxn (Academic) 210513 30 rxns お問い合わせください Call Quick and efficient method for carrying out site-directed mutagenesis in up to 5 sites simultaneously using new QuikChange Lightning enzyme formulation combined with a rapid protocol 3x faster than the original QuikChange Multi kit. All necessary components required to perform 30 multi-site mutagenesis reactions. No additional purchase is required. For academic use only. 分析保証書 (C of A)　　 マニュアル
QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kit, 10 rxn (Commercial) 210516 10 rxns お問い合わせください Call Quick and efficient method for carrying out site-directed mutagenesis in up to 5 sites simultaneously using new QuikChange Lightning enzyme formulation combined with a rapid protocol 3x faster than the original QuikChange Multi kit. All necessary components required to perform 10 multi-site mutagenesis reactions. No additional purchase is required. Includes limited use commercial license. 分析保証書 (C of A)　　 マニュアル
QuikChange Lightning Multi Site-Directed Mutagenesis Kit, 30 rxn (Commercial) 210514 30 rxns お問い合わせください Call Quick and efficient method for carrying out site-directed mutagenesis in up to 5 sites simultaneously using new QuikChange Lightning enzyme formulation combined with a rapid protocol 3x faster than the original QuikChange Multi kit. All necessary components required to perform 30 multi-site mutagenesis reactions. No additional purchase is required. Includes limited use commercial license. 分析保証書 (C of A)　　 マニュアル