PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase & PCR Master Mix [RUO]

PfuUltra II fusion HS DNA ポリメラーゼ

アジレント(旧ストラタジーン)の第二世代のPfu-based fusion DNA ポリメラーゼは高フィデリティー（正確性）PCRの新たな基準をつくりました。アジレント(旧ストラタジーン)の新しいPfuUltra II fusion HS DNA ポリメラーゼは、ポリメラーゼ融合技術、PfuUltra DNA ポリメラーゼ、ホットスタート抗体、ArchaeMaxx polymerase enhancing factor を組み合わせ最高の正確性、優れた信頼性、長い最大増幅鎖長を短時間のPCR伸長反応で実現します。

競合他社をリードするフィデリティー

PfuUltra II fusion HS DNA ポリメラーゼはultra-high fidelityの新たな基準です。アジレント(旧ストラタジーン)のフィデリティー（正確性）の測定法(3)はPfuUltra II fusion HS DNA ポリメラーゼが他のプルーフ・リーディング・ポリメラーゼより３倍以上正確性が高いこと、PfuUltra Hotstrat DNA ポリメラーゼと同等の正確性を持つことを示しています。PfuUltra II DNA ポリメラーゼのerror rate（ミスを犯す頻度）は2,500,000ヌクレオチドに１回で、これはTaq DNA ポリメラーゼのミスの頻度より25倍も低いものです。図１はアジレント(旧ストラタジーン)の測定法を用い、PfuUltra II  DNA ポリメラーゼと他のプルーフ・リーディング・ポリメラーゼの精度を示したものです。アジレント(旧ストラタジーン)では確立された方法論により、各DNA ポリメラーゼの相対的な正確性の違いを導きだしており、一貫してこの方法を用いています。

向上したProcessivity

二本鎖DNA結合ドメインとPfuUltra DNA ポリメラーゼを融合することにより、Pfu-ベース酵素のProcessivityを格段に向上させました。このドメインはDNA ポリメラーゼを テンプレートDNA により強力に結合し、初期段階においてのDNA ポリメラーゼのテンプレートDNA からの解離を防ぎます。PfuUltra II DNA ポリメラーゼのProcessivityはPfu ポリメラーゼと比較し12倍に向上しています（表１）。各社に推奨されているPCRバッファー使用下で比較した結果、PfuUltra II DNA ポリメラーゼのProcessivityは他の融合酵素 (Fusion enzyme) 、PhやPUポリメラーゼの５倍以上でした。融合酵素のProcessivityが向上することにより、PCRの収量が向上し、反応時間が短縮されます。したがって、時間を節約することができ、過酷なサイクリング温度への露出を抑え、テンプレートの質を向上します。

表１： PfuUltra II Fusion HS DNA polymeraseでの卓越Processivity

ArchaeMaxx polymerase enhancing factor の利点

高い正確性に加え、PfuUltra II fusion HS DNA ポリメラーゼはアジレント(旧ストラタジーン)独自のArchaeMaxx polymerase enhancing factor によって、優れた総合的パフォーマンスと長いターゲットのより力強い増幅を実現します。ArchaeMaxx factor はPCR中のdCTPの脱アミノ化によるdUTP蓄積によって引き起こされる"dUTPによる阻害"を克服することによって、Pfu DNA ポリメラーゼによる産物の収量を向上させます(1)。dUTPの取り込みはPfu やその他多くの古細菌性プルーフ・リーディング・ポリメラーゼの働きを抑制し、これらの酵素の効率を制限します(2)。ArchaeMaxx factor はdUTPaseとして機能し阻害性のあるdUTPを阻害性の無いdUMPと無機ピロリン酸へ変換し、その結果、短い伸長時間、高い収量、長い最大増幅鎖長など、全体としてPCRパフォーマンスを大いに向上します。

最高の信頼性

PfuUltra II fusion HS DNA ポリメラーゼの向上したProcessivityとArchaeMaxx polymerase enhancing factor により、本酵素の信頼性が向上しました。ArchaeMaxx factor はプルーフ・リーディング・ポリメラーゼの働きを抑制するdUTPを除去します(3)。PfuUltra II DNA ポリメラーゼは高フィデリティー、特異性、ハイスループットが要求される多様なクローン・コレクションを増幅するときに最適です。

短時間で長いターゲットの増幅

PfuUltra II fusion HS DNA ポリメラーゼは他のプルーフ・リーディング・ポリメラーゼと比較し、より幅広いサイズのテンプレートを増幅します。短いサイクリング・タイムで使用可能なので、短時間で19kbまでのゲノム・テンプレートを増幅することができます（図３）。例えば、図３に示されているように、他のプルーフ・リーディング・ポリメラーゼは19kbのターゲットを増幅するのに19時間以上要するのに対し、PfuUltra II DNA ポリメラーゼは５時間で増幅することができます。また、Ph DNA ポリメラーゼが6kbまでのターゲットしか増幅できないように、PfuUltra II DNA ポリメラーゼと比較すると他の融合酵素 (Fusion Enzyme) は増幅可能なターゲットの長さが制限されています（図２）。突然変異が生じる頻度は、アンプリコンのサイズに比例して高くなることから、長いターゲットを増幅する際にはフィデリティーの高い酵素を使用することが重要になります。

図２：Fusion型DNA Polymeraseでの可能な短縮時間

PfuUltraTM II Fusion HS DNA Polymeraseとヘラクレス（Herculase） II Fusion DNA Polymerase、他のProof-Reading機能を持つポリメラーゼ、TaqポリメラーゼのPCR反応の所要時間を比較しました。各酵素が推奨する伸長時間を用いて、2.6Kb、6Kb、12Kbの断片を増幅するための30サイクルからなる3-ステップPCRにおける反応時間の比較です。

ホットスタート仕様により特異性が向上

PfuUltra II fusion HS DNA ポリメラーゼは特異性を向上し、またバックグラウンドを減少し、困難なPCRの収量を向上します。ホットスタート仕様にはモノクローナル抗体が含まれており、サイクリングが始まるまでDNA ポリメラーゼと3'-5'エクソヌクレアーゼ活性を抑制します。PfuUltra II DNA ポリメラーゼは複雑なゲノムDNAから低コピー数のターゲットを増幅するときやPCR反応を室温で長時間放置するときに理想的です。

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Figure 3 Greatest Success Rate with our PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase A random set of 94 clones from a human cDNA library was amplified from bacterial colonies. The amplicon sizes varied between 1 and 3 kb. The PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase amplified 91 of 94 randomly selected clones (97%) with high yields and a fast cycling time.

Figure 4 PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase Amplifies a Wide Range of Targets The PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase amplifies a broad range of genomic DNA targets up to 19 kb in length. In contrast, other commercial enzymes exhibit limited target-length capability.

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PfuUltra II Hotstart PCR Master Mix, 100 rxn 600850 100 rxns お問い合わせください Call 2x master mix formulation of PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase. PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase, optimized PCR reaction buffer, MgCl2, dNTPs. 分析保証書 (C of A)　　 マニュアル
PfuUltra II Hotstart PCR Master Mix, 400 rxn 600852 400 rxns お問い合わせください Call 2x master mix formulation of PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase. PfuUltra II Fusion HS DNA Polymerase, optimized PCR reaction buffer, MgCl2, dNTPs. 分析保証書 (C of A)　　 マニュアル