AccuScript High Fidelity Reverse Transcriptase Products [RUO]

用途

• PCRで使用するための first strand cDNA合成
• 遺伝子クローニング、シークエンシング、およびタンパク質発現実験のための完全長cDNAの合成
• RNAウイルスの同定

アジレント(旧ストラタジーン)のAccuScript 逆転写酵素は他の主要な逆転写酵素よりも３倍以上も正確です。このMMLV-RT由来の逆転写酵素は高い正確性の他に、20kb までの完全長cDNA合成を可能にするなど総合的に高いパフォーマンスを発揮します（図３）。

最も正確な逆転写酵素

逆転写酵素(RT)はcDNA合成中に 1500～30000 ヌクレオチドあたりにひとつの頻度でエラーをもたらす他の既知のDNAポリメラーゼよりも非常に高いエラー率を示します(1)。この低い正確度の問題を解決するために、アジレント(旧ストラタジーン)はAccuScript 逆転写酵素^**を提供します。この酵素はモロニーマウスの白血病ウイルス逆転写酵素(MMLV RT)由来で、高収量で完全長cDNAを合成し、RT-PCRにおいても高いパフォーマンス発揮すように構築されました。AccuScript RT は SS2と SS3 (I社)と比較し3.7倍以上、TS(R社) と AMV RT と比較しそれぞれ4.7倍と6.6倍もの正確性をもちます(図1)。  

ハイフィデリティーかつ高収量のRT-PCR

ハイフィデリティーかつ高収量のRT-PCRはクローニングやライブラリー構築、そして遺伝子発現解析などの downstream 用途に重要です。 AccuScript RT は特に長い標的や少ないRNA量から増幅する場合に適しています。高い正確性と高収率のRT-PCRは AccuScript RT と PfuUltra DNAポリメラーゼを併用、更に高い収量が必要な場合には、AccuScript RT と PicoMaxx High Fidelity PCR system^***‡の併用が最適な結果をもたらします。

First strand cDNA合成キットにより簡単・迅速にcDNAを合成

AccuScript high fidelity first strand cDNA synthesisキットはランダム・プライマーとオリゴ‐dT プライマーの両方が含まれており、用途によって使い分けできます。より良いRT-PCRの結果を得るために高品質、ハイフィデリティー・グレードの first strand 試薬も含まれています。また、効率的なプロトコールによりcDNA反応を簡単かつ迅速に行うことができ、貴重な研究時間の節約につながります。

便利なRT-PCR キット

ハイフィデリティーRT-PCRにはAccuScript High Fidelity RT-PCR kit をお奨めします。このキットにはAccuScript RT 、PfuUltra High Fidelity DNA PolymeraseおよびdNTP、ランダム・プライマー、オリゴ‐dT プライマーなどcDNA合成とPCRに必要な試薬がほとんど全て含まれています。本キットを使用すれば、最長9.6kbまでのターゲットを高収量でえることができます（図４）。

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Figure 1: AccuScript" High Fidelity Reverse Transcriptase Produces Nearly Error-Free cDNA

Figure 3: Full Length cDNA up to 20kb! We used AccuScript High Fidelity Reverse Transcriptase to produce first strand cDNA for subsequent PCR amplification with PicoMaxx DNA polymerase. Shown here is a successful PCR amplification of 0.61kb fragment located at 5’ end of the human nebulin gene, which is 20.8kb in length. This demonstrates complete reverse transcription of the human nebulin gene by AccuScript RT

Figure 2 Comparison of AccuScript PfuUltra II RT-PCR kit with high fidelity PCR-RT combinations from a leading competitor. Various length cDNA’s were amplified from total RNA (isolated from solid tissue), PCR reactions were set up using manufacturers recommended conditions with 2.5U of enzyme, 1µl cDNA/50µl reaction and were performed for 40 cycles. The different cDNA’s amplified are as follows; 0.514 kb Mouse beta actin, 1.8 kb Human dystrophin, 4.1kb Mouse complement and 6.9 kb Human apolipoprotein.

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Product	Catalog #	Amount	Price
AccuScript High Fidelity First Strand cDNA Synthesis Kit 200820 50 rxns お問い合わせください Call AccuScript high fidelity first strand cDNA synthesis system delivers the highest accuracy and offers you greater flexibility to use the cDNA in your choice of downstream applications such as PCR amplification or real-time PCR quantification AccuScript RT, 10X RT reaction Buffer, RNase Block Ribonuclease Inhibitor, 100 mM dNTP mix, oligo(dT) and random primers, 10X First strand buffer, Rnase-Free H20 分析保証書 (C of A)　　 マニュアル