細胞内タンパクの検出

フローサイトメトリーは、これまでは異なる細胞集団を特定する目的で、細胞表面タンパクの検出に用いられてきました。近年の技術と試薬の進歩に伴い、今では個々の細胞の細胞内タンパクを容易に検出できるようになっています。細胞内タンパク検出の非常に有用なアプリケーションの 1 つは、特定の細胞のシグナル伝達パスウェイの測定です。それらのパスウェイは、がんなどの疾患の病態においてしばしば変化しますが、現在はフローサイトメトリーで容易に検出でき、シグナル伝達の変化のシングルセル解析が可能です。

Jurkat 細胞を無刺激で培養（pERK unstim）、または細胞刺激カクテル（pERK +stim）で 1 時間刺激しました。細胞を洗浄、固定、膜透過処理した後に、PerCP 標識anti-phospo-ERK1/2（T204/Y202）抗体で 1 時間染色しました。細胞を洗浄し、NovoCyte フローサイトメーターでリン酸化 ERK を分析して、NovoExpress ソフトウェアで重ね書きヒストグラムを作成してリン酸化レベルを比較しました。