プロトロンビン遺伝子中のPoint Mutationの検出

Pub.No. 5989-4313EN

Detection of a point mutation in the prothrombin gene with the Agilent 2100 bioanalyzer (プロトロンビン遺伝子中の Point Mutation の検出)

プロトロンビンは血液凝固系における重要なタンパク質である。このタンパク質遺伝子の非トランスレーション部位における G20210A 変異は血漿プロトロンビン濃度の増加を引き起こし、静脈血栓の危険性を著しく増加させる。ヘテロ接合体 （heterozygous) の変異は危険性が 2-3 倍増加し、ホモ接合体 （homozygous) の変異はさらに高くなる。そしてその静脈血栓は次のリスクファクターを増加させる （動脈血栓の危険性を増加させる報告もある。ただし、状況にも依存するとも議論されている）。本例では静脈血栓疾患と健常な血液試料から抽出したゲノム DNA をもちいて、PCR-RFLP 法により G20210A の多型性を検出した例を示す。
G20210A 変異をもつ遺伝子にのみ HindIII 制限酵素部位を導入するように PCR プライマー (Reverese primer: 20233-20212） を設計し増幅反応を行う。その後制限酵素処理を行うと変異の導入されている DNA のみ切断され、322 bp と 23 bp の断片を生じる （野生型の場合は切断されず 345 bp 断片のままである）。バイオアナライザを用いることにより変異型ホモ接合対 （変異型の増幅産物のみ生じる） ・ ヘテロ接合体 （変異型・野生型の両方の増幅産物を生じる） ・ 野生型ホモ接合対 （野生型の増幅産物のみ生じる） を効率的に検出・分類することができた。

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